▋產(chǎn)品簡介：
酵母雙雜的原理基礎(chǔ)：很多真核生物的位點特異轉(zhuǎn)錄激活因子通常具有兩個可分割開的結(jié)構(gòu)域，即 DNA特異結(jié)合域（DNA-binding domain,BD）與轉(zhuǎn)錄激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。這兩個結(jié)構(gòu)域各具功能，互不影響。但一個完整的激活特定基因表達的激活因子必須同時含有這兩個結(jié)構(gòu)域，否則無法完成激活功能。不同來源激活因子的 BD 區(qū)與 AD 結(jié)合后則特異地激活被 BD 結(jié)合的基因表達。基于這個原理，可將兩個待測蛋白分別與這兩個結(jié)構(gòu)域建成融合蛋白，并共表達于同一個酵母細胞內(nèi)。如果兩個待測蛋白間能發(fā)生相互作用，就會通過待測蛋白的橋梁作用使 AD 與 BD 形成一個完整的轉(zhuǎn)錄激活因子并激活相應(yīng)的報告基因表達。通過對報告基因表型的測定可以很容易地知道待測蛋白系統(tǒng)。分子間是否發(fā)生了相互作用。
酵母雙雜交系統(tǒng)主要由三個部分組成：（1）與 BD 融合的蛋白表達載體，其表達的蛋白稱為誘餌蛋白（bait）。（2）與 AD 融合的蛋白表達載體，其表達的蛋白稱為靶蛋白（prey）。（3）帶有一個或多個報告基因的宿主菌株。常用的報告基因有 HIS3 ，URA3 ，LacZ 和 ADE2 等，不同菌株則具有相應(yīng)的缺陷型。雙雜交質(zhì)粒上分別帶有不同的抗性基因和營養(yǎng)標記基因，這些有利于實驗后期雜交質(zhì)粒的鑒定與分離。根據(jù)目前通用的系統(tǒng)中 BD 來源的不同主要分為 GAL4 系統(tǒng)和 LexA，雙雜交目前常用的是 Y2HGold-GAL4 和 AH109-GAL4 系統(tǒng)。
AH109 是 GAL4 系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株，MATa 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺c MATα 型酵母菌株 Y187 通過mating 操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker 為：trp1，leu2，報告基因為：lacZ，HIS3 ，ADE2，MEL1。AH109-GAL4 酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pGBKT7 和 pGADT7。質(zhì)粒 pGBKT7的篩選標志為 TRP1，用于表達 DNA-BD（來自酵母轉(zhuǎn)錄因子 GAL4N 端 1~174 位氨基酸）與目標蛋白（Bait）的融合蛋白；質(zhì)粒 pGADT7 的篩選標志為 LEU，用于表達 AD（GAL4 C 端 768~881 位氨基酸）與目標蛋白（Prey）的融合蛋白。
▋保存/運輸：
培養(yǎng)基系列保質(zhì)期2年，鑒定試劑盒、甘油菌保質(zhì)期1年，感受態(tài)保質(zhì)期3個月；感受態(tài)干冰運輸，其余產(chǎn)品冰袋運輸；各類產(chǎn)品按照標簽所示溫度進行儲存。
